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使用血细胞计数板的步骤
作者:管理员    发布于:2014-04-23 01:05:28    文字:【】【】【

使用血细胞计数板的步骤
使用16×25规格的计数板时,只计板上四个角上的4个中格(即100个小格),如果使用25×16规格的计数板时,除计四个角上的4个中格外,还需要计中央一个中格的数目(即80个小格)。每个样品重复观察计数不少于2次,然后取其平均值。
计算
(1)16×25的计数板  
孢子数(个/g)=(N/100) ×400×10000×(V/G)=4×104×(NV/G)…………(1)
                       式中  N——100小格内孢子总数 (个)
                             V——孢子稀释液体积 (ml)
                             G——样品重量  (g)
(2) 25×16的计数板
孢子数(个/g)=(N/80) ×400×10000×(V/G)=5×104×(NV/G) …………………………(2)
                       式中  N——80小格内孢子总数 (个)
                             V——孢子稀释液体积 (ml)
                             G——样品重量 (g)
1.将血细胞计数实验结果填入下表。
计 算
次 数 4个大方格白细胞数 5个大方格红细胞数
 1 2 3 4 总数 1 2 3 4 5 总数
第1次           
第2次           
两次平
均总数           
血细胞
计  数           
           
4.充液
2类血细胞计数分2次充液,方法如下。
(1)取干净的计数板平放于实验桌上,将盖玻片置入计数板正中央。★计数板和盖玻片在使用前必须用软绸或擦镜纸擦净,并在低倍镜下检查计数室是否干净,其刻度是否清晰。用小滴管吸取稀释血液,并将管尖轻轻斜置于盖玻片边缘,让稀释血液缓慢流出,借毛细管现象而自动流入计数室内。一般应一次充液使计数室内充满稀释血液,若经几次充液,易形成气泡,应洗净计数板和盖玻片,干燥后重新充液。
(2)稀释的血液充入计数室后,静置2~3min,待细胞不再浮动后,于低倍镜下计数。
5.计数
为防止重复计数和漏数,计数时应遵循一定的顺序进行,即“从左到右,自上而下”;对正好压在格线上的血细胞,依照“数上不数下,数左不数右”的原则进行计数(图3-2)。
如计数白细胞时发现各大方格的白细胞数相差8个以上,计数红细胞时发现各中方格的红细胞数多与少相差20个以上时,则表示血细胞分布不均匀,必须将稀释的血液摇匀后再重新充入计数室计数。
6.计算
(1)白细胞数  将四角的4个大方格内数得的白细胞总数乘以50,即得每立方毫米血液内的白细胞总数,也可将对角两个大方格内数得的白细胞总数乘以100。因为:
稀释液0.38mL加入血液20mm3(1mL=1000mm3,
故20mm3=0.02mL,),使血液稀释20倍,换算成未稀释血时应乘以20。
在计数时仅统计四角的4个大方格内的白细胞,其容积为lmm×1mm×0.1mm×4=0.4mm3,换算成每立方毫米时应乘以2.5。这样,把四角4个大方格内数得的白细胞总数乘以50(即20×2.5=50),即得每立方毫米血内的白细胞总数。
(2)红细胞数  将中央大方格中的四角和中央的中方格共5个中方格内数得的红细胞总数乘以10 000,即得每立方毫米血内红细胞的总数。因为:
稀释液3.98mL,加入血20mm3(即0.02mL),使血液稀释200倍,换算成未稀释血时应乘以200。
在计数时仅统计0.02 mm3内的红细胞(1个中方格的容积为0.2mm×0.2mm×0.1mm=0.004mm3,5个中方格的容积为0.004mm3×5=0.02mm3),换算成每立方毫米时应乘以50。这样把5个中方格内数得的红细胞总数乘以10 000(即200×50=10000),即得每立方毫米血内的红细胞总数。
(3)按目前临床上血细胞计数采用的通用单位,将以上所获每毫升血液中所含各血细胞数量换算为各血细胞在每升血液中的数量。
7.清洗血细胞计数板
盖玻片及计数板用过之后,必须立即用水冲洗,但不可用硬物刷洗。计数板晾干或吹风机吹干后,应镜检计数室是否干净,如不干净必须重复洗至干净为止。

 

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